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用恒溫培養箱測定維生素C
點擊次數:129 發布時間:2019-06-12

        維生素C是一種已糖醛基酸,有抗壞血病的作用,所以被人們稱做抗壞血酸,主要為還原型及脫氫型兩種,廣泛存在于植物組織中,新鮮的水果、蔬菜,特别是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、猕猴桃、柑橘等食品中含量較多。它是氧化還原酶之一,本身易被氧化,但在有些條件下又是一種抗氧化劑。

 

        維生素C(還原型)純品為白色無臭結晶,熔點190~192℃,溶于水或乙醇中,不溶于油劑。在水溶液中易被氧化,在堿性條件下易分解,在弱酸條件中較穩定,維生素C開始氧化為脫氫型抗壞血酸(有生理作用)。如果進一步水解則生成2,3-二酮古樂糖酸,失去生理作用。

根據它具有的還原性質可以測定維生素C的含量。常用的測定方法有

(1)2,6-二氯靛酚法  (還原型VC)

(2)2,4-二硝基苯肼法  (總VC)

(3)碘酸法

(4)碘量法

(5)熒光分光光度法

        下面小編主要為大家介紹一下前兩種方法:

        一、2,6-二氯靛酚滴定法

        1、原理:

        還原型抗壞血酸還原染料2,6-二氯靛酚,該染料在酸性中呈紅色,被還原後紅色消失。還原型抗壞血酸還原2,6-二氯靛酚後,本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質幹擾時,一定量的樣品提取液還原标準2,6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。

        2、試劑

⑴ 1%草酸溶液:稱取10g草酸,加水至1000ml;

⑵ 2%草酸溶液:稱20g草酸,加水至1000ml;

⑶ 維生素C标準液:準确稱20mgVC溶于1%草酸中,并稀釋至100ml,吸5ml于50ml容量瓶中,加入1%草酸至刻度,此溶液每毫升含有0.02mgVC;

⑷ 0.02%2,6-二氯靛酚溶液:稱取2,6-二氯靛酚50mg,溶于200ml含有52mg碳酸氫鈉的熱水中,冷卻後,稀釋至250ml,過濾于棕色瓶中,貯存于冰箱内,應用過程中每星期标定一次。

标定一:吸标液(VC)5ml于三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%澱粉3滴→用0.001N KIO3标液滴定到淡蘭色。

計算:

抗壞血酸濃度(mg/ml)= (V1 × 0.088)/ V2

V1 - 滴定時消耗0.001N KIO3标液的體積(ml)

V2 -維生素C重量(g)

0.088 -1ml0.001N KIO3标液≈維生素C的量(mg/ml)

标定二:吸5ml已知濃度V C标液 → 加5ml1%草酸 → 用染料2,6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉紅色,在15秒不褪色為終點

計算:每毫升2,6-二氯靛酚相當于維生素C的毫克數等于滴定度(T)

T= (C × V1)/  V2

C - 維生素C的濃度(mg/ml)

V1 -維生素C的體積(ml)

V2 -消耗2,6-二氯靛酚的體積(ml)

⑸ 0.001N KIO3标液:吸0.1N KIO3溶液5ml→于500ml容量瓶内→加水至刻度,每毫升相當于VC0.008mg;

⑹ 0.5%澱粉溶液;

⑺ 6%KI溶液;

        3、操作方法

⑴ 提取:稱樣50g→加2%草酸100ml→到入搗碎機中→處理→過濾→顔色若深可加白陶土

⑵ 滴定:吸5ml樣液→于三角瓶→用染料滴定至粉紅色→15秒内不褪色

計算:

VC(mg/100g)=(V × T)/ W   × 100

V -消耗染料體積(ml)

T -1ml染料所能氧化維生素C的毫克數

W- 滴定時所有濾液中含有樣品的克數

        4、注意事項

⑴ 所有試劑的配制建議都用重蒸餾水;

⑵ 滴定時,可同時吸二個樣品。一個滴定,另一個作為觀察顔色變化的參考;

⑶ 樣品進入實驗室後,應浸泡在已知量的2%草酸液中,以防氧化,損失維生素C;

⑷ 貯存過久的罐頭食品,可能含有大量的低鐵離子(Fe2+),要用8%的醋酸代替2%草酸。這時如用草酸,低鐵離子可以還原2,6-二氯靛酚,使測定數字增高,使用醋酸可以避免這種情況的發生;

⑸ 整個操作過程中要迅速,避免還原型抗壞血酸被氧化;

⑹ 在處理各種樣品時,如遇有泡沫産生,可加入數滴辛醇消除;

⑺ 測定樣液時,需做空白對照,樣液滴定體積扣除空白體積。

        二、2,4-二硝基苯肼法

        可測總抗壞血酸,總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸型。此法是将樣品的還原型抗壞血酸氧化為脫氫型抗壞血酸,然後與2,4-二硝基苯肼作用,生成紅色的脎。脎的量與總抗壞血酸含量成正比,将紅色脎溶于硫酸後進行比色,由标準曲線計算樣品中總VC。

1、原理:

         用酸處理過的活性碳把還原型的抗壞血酸氧化為脫氫型抗壞血酸,在繼續氧化為二酮古樂糖酸。

        二酮古樂糖酸與2,4-二硝基苯肼偶聯生成紅色的脎,其成色的強度與二酮古樂糖酸濃度呈正比,可以比色定量。

2、步驟

⑴ 樣品處理與分析

          稱一定樣 → 加等量2%草酸 → 于高速搗碎機搗碎 → 取勻漿20g → 用1%草酸定容100ml → 過濾 → 取濾液10ml → 加1%草酸10ml → 加少量活性炭 → 搖1分鐘 → 靜置過濾 → 各取濾液2ml于樣品管和樣品空白管 → 各管加入1滴硫脲溶液 → 于樣品管中加入2,4-二硝基苯肼0.5ml → 分别于兩個管加蓋 → 于37℃保溫箱3小時 → 取出後樣品管放入冰水中 → 樣品空白管取出後冷至室溫 → 在樣品空白管加入2,4-二硝基苯肼 → 0.5ml → 樣品管和空白管都于冰浴中 → 滴加85%H2SO42ml于各管中 → 邊滴邊搖 → 防止溫度升高炭化後呈黑色 → 冰浴中30分鐘後取出 → 室溫下放置30分鐘後,在540nm測消光值,從标準曲線上查出相應的含量

⑵ 标準曲線的繪制

取5個50ml容量瓶編号  1     2     3     4     5

加VC标液0.2mg/ml     10    20    30    40    50ml

取5個比色管取相應     2     2     2     2     2

加硫脲溶液(滴)       1     1     1     1     1

2,4-二硝基苯肼(ml)0.5   0.5    0.5   0.5    0.5     

于37℃電熱恒溫培養箱3~4小時,取出于冰浴中,然後滴加85%硫酸2.5ml→取出放30分鐘→在540nm下測各消光值繪标準曲線,同時做空白。

計算:每百克食品中抗壞血酸的毫克數=C/W *100

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